IMPACTO DO AZUL DE METILENO NO PADRÃO COMPORTAMENTAL E MOLECULAR DE CRISES EPILÉPTICAS EM ZEBRAFISH

RESUMO

As epilepsias representam um conjunto de doenças neurológicas crônicas caracterizadas por crises epilépticas e que afetam milhões de pessoas ao redor do mundo com grande estigma social envolvido. O Danio rerio, popularmente conhecido como zebrafish, é um modelo de grande importância experimental para várias condições humanas, inclusive as epilepsias e crises epilépticas. O Azul de Metileno (AM) é uma substância conhecida por sua ação antioxidante e de neuroproteção e, por essa razão, seu potencial terapêutico tem sido investigado em algumas doenças neurodegenerativas. Além disso, o AM é comumente utilizado como desinfetante de aquário em laboratórios que utilizam o zebrafish como modelo de estudo. Desta forma, este estudo investigou qual o papel do AM no padrão comportamental e molecular das crises epilépticas induzidas em zebrafish. Pelo fato do AM ser frequentemente utilizado como um antifúngico em laboratórios experimentais e incorporado ao meio de crescimento/manutenção de embriões e larvas de zebrafish, este estudo também investigou se o uso do AM no meio de manutenção, pode influenciar resultados experimentais. Na investigação, empregamos dois diferentes protocolos de indução de crises epilépticas por pentilenotetrazol (PTZ), na concentração 15mM, sendo um agudo (20 minutos) e outro de status epilepticus-like (3 horas). Para investigar se o AM é capaz de atenuar as crises epilépticas, os animais com 6 dias pós-fertiização (dpf) foram expostos ao AM 0,5µM por 24h antes da exposição ao PTZ. Para investigar se o uso do AM na manutenção de embriões e larvas pode modificar respostas experimentais, os animais foram criados em meio acrescidos de AM 0,1µM até a idade de 7 dpf. Aos 7dpf animais expostos ao AM ou controle, foram expostos ao PTZ para elicitar crises epilépticas. A atividade do nado (velocidade e distância percorrida) foi quantificada por meio do software de rastreamento EthoVision em equipamento Danio Vision. Por meio da quantificação de transcritos por qPCR em tempo real, foram investigados o perfil dos genes c-fos (atividade neuronal), casp3 (pró-apoptótico), bcl2a (anti-apoptótico), e sod2 (estresse oxidativo). Nossos dados mostraram que o AM não alterou o comportamento dos animais quando estes foram induzidos a crises epilépticas. Por outro lado, o AM na concentração de 0, 5µM por 24h, reduziu significativamente o impacto do PTZ no cérebro do zebrafish, diminuindo a atividade neuronal durante as crises epilépticas do tipo status epilepticus em comparação com o tratamento de manutenção de colônia (0, 1µM). Nossa investigação também evidenciou que o uso do AM, em protocolos de manutenção de colônia de zebrafish, não modificou a atividade de nado das larvas induzidas a crises epilépticas, assim como, não teve influência significativa sobre o perfil dos transcritos dos genes investigados.

PALAVRA-CHAVE: Zebrafish, Crises Epilépticas, Azul de Metileno, Pentilenotetrazol

  Apresentação